Determinación por pcr en tiempo real de escherichia coli en muestras de comida rápida

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Viviana Chiluisa Utreras
Jorge Coba
Andrea Echeverría

Palabras Clave

E.coli, alimentos, técnicas, PCR en tiempo real, microbiología

Resumen

En la presente investigación se analizaron muestras de alimentos expendidos en las calles aledañas a la Universidad Politécnica Salesiana, Sede El Girón y se determinó la presencia de Escherichia coli mediante la técnica de PCR en Tiempo Real con una comprobación microbiológica en tres establecimientos de comida rápida más concurridos por la comunidad de estudiantes de las Universidades cercanas. Para lograr un análisis estadístico confiable, se analizaron alrededor de 15 muestras de alimentos por cada uno de los establecimientos con diferentes productos. Se elaboró un protocolo para la cuantificación de la muestras, utilizando una curva estándar para E. coli. Los análisis microbiológicos se realizaron por un método estándar convencional por cultivo en medios específicos (EMB, Mckonkey) y la PCR en tiempo real con un diseño de primers específicos y el kit de LC FS DNA MasterˆPLUS HY-Pb, 96 react. (Roche Diagnostics). Con la PCR se aisló E. coli en el 100 % de las muestras, mientras que por el método convencional se detectó tan solo el 53,36 %. La prueba de χ2 mostró significancia estadística entre ambas técnicas. El método molecular reveló un total de 100 % de casos positivos en los alimentos expendidos en los tres establecimientos de comida rápida que presentaron mayor contaminación por E.coli, mientras que a través del método convencional se obtuvieron en: hamburguesas 40 %, shawarmas 66.7 % y pinchos 53.3 % de casos positivos respectivamente. Se observó además diferencias con respecto al tiempo empleado por cada una de las técnicas: la PCR permite obtener resultados mucho más sensibles, rápidos y específicos, en comparación con el método convencional de cultivos celulares. Mediante la curva estándar se logró cuantificar la cantidad de ADN en cada muestra.
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Citas

Almeida, C. 2002. Sistemas modernos de inspección y control de alimentos. Bogotá, Colombia, pág. 315.

Arola, L., E. Arroyo y B. I. 2008. Genética, Nutrición y Enfermedad. Edimsa.

Barleta, F., T. Ochoa y L. Ecker. 2009. Validation of five-colony pool analysis using multiplex realtime pcr for detection of diarrheagenic escherichia coli. J Clin Microbiol.

Bustos, R. 1997. Informe final y documentos seleccionados. X reunión interamericana de salud animal a nivel ministerial. En: Comisión Nacional Asesora en Materia Alimentaria del Uruguay, Ed. OPS: 83-91, Washington.

Codex Alimentarius. Código de prácticas de higiene para la elaboración y expendio de alimentos en la vía pública en América Latina y el Caribe CAC/RCP 43-1995. URL ⟨http://www.codexalimentarius.net/ download/standards/28/RCP_043s.pdf⟩.

Daum, L., W. Barnes, J. McAvin, M. Neidert, L. Cooper y W. Huff. Real time PCR detection of Salmonella in suspect foods from a gastroenteritis outbreak in Kerr County, Texas. J Clin Microbiol, 40(3050-2).

Gálvez, E. 2011. Calidad e inocuidad en las cadenas latinoamericanas de comercialización de alimentos. URL ⟨http://www.fao.org/Ag/ags/ subjects/es/agmarket/agsfop⟩, consulta 15 de junio de 2011.

González, T. y R. Rojas. 2005. Enfermedades transmitidas por alimentos y pcr: prevención y diagnóstico. Rev Salud Pub Mex.

Guion, C., T. Ochoa y W. CM. 2008. Detection of diarrheagenic escherichia coli by use of meltingcurve analysis and real-time multiplex pcr. J Clin Microbiol.

Hannaoui, E., L. Villalobos y R. Martínez. 2010. Escherichia coli diarreogénica asociada a casos de diarrea aguda en niños de Cumaná, Venezuela. SciELO.

Instituto Nacional de Salud. 2008. Enfermedades transmitidas por alimentos. URL ⟨http://www. ins.gov.co/pdf/vcsp/Protocolo⟩, consulta 12 de mayo 2012.

Roche Diagnostics. 2010. LightCycler